translate dr pak pinem

Pengaruh Pertumbuhan Dan Pematangan Tanaman Inang Pada

Perkembangan Virus

 

P.C CHEO

Tujuan : (1) untuk mendeteksi konsentrasi virus yang aktif di bagian bunga yang berbeda dari tanaman kacang yang terinfeksi virus mosaik kacang selatan; (2) untuk menunjukkan keberadaan virus pada embrio muda yang terinfeksi benih kacang sistemik dan penghambatan akhir virus dalam embyo karena proses pematangan perkembangan benih.

Bahan-bahan: tanaman kacang yang terinfeksi virus mosaik kacang selatan, berumur 3-4 minggu, inokulasi mekanis dalam tahap daun utama (varietas Logan, Black Valentine, Tendergrees, Bountifull, atau lainnya); uji pelukaan tanaman. bibit kacang Buncis; kaca spatula untuk inokulasi virus; Carborundum 600-mesh, pengocok Carborundum ukuran 8-inci. Tabung kaca panjang (6 mm diameter) untuk digunakan sebagai penetetesan; larutan buffer Phospate netral 0,1 M; tabung uji; kertas label; pringan dan alu, pestridis, di dalam kertas dipasang kain tipis 5 ml dan pipet 1ml; counter; torsi keseimbangan; alat pembeku, botol kaca.

Prosedur: Perbandingan konsentrasi relatif dari virus yang aktif di berbagai bagian sistematis tanaman kacang terinfeksi. Siapkan larutan penyangga fosfat netral sebagai berikut. Solusi A, 5,52 g NaH₂PO₄. H₂O dalam 400 ml air; solusi B, 16,08 g Na₂HPO₄. 7H₂O dalam 600 ml air. Tambahkan 321 ml larutan A untuk 600 ml larutan B.

Untuk mempersiapkan inokulum standar, diencerkan 1:200 campuran daun dari keseluruhan, muda, tanaman yang terinfeksi secara sistemik dengan larutan fosfat buffer digunakan sebagai inokulum standar. Pengenceran tersebut, bagaimanapun, tergantung pada konsentrasi virus dari jaringan daun terinfeksi yang digunakan. Inokulum standar yang disiapkan harus memberikan sekitar 150-300 pelukaan  di daun inokulasi pada kacang Buncis. Bagikan inokulum standar ke dalam botol kecil dan tetap beku sampai digunakan. Untuk diinokulasi 10 daun untuk pengujian virus (satu tetes inokulum virus / daun) sekitar 2 ml inokulum virus diperlukan.

Untuk mempersiapkan sampel untuk pengujian virus, timbang 2 g kumpulan sampel (daun, bagian bunga, mantel biji, embrio, akar, dll). Digiling dalam mortir di hadapan sejumlah kecil buffer fosfat. Tambahkan  5-6 dari total buffer fosfat dan aduk rata.

Bandingkan infektivitas masing-masing sampel dengan inokulum standar (cairan segar dan digunakan sekaligus) dengan inokulasi inokulum sampel pada salah satu daun utama usia 2 minggu bibit kacang Buncis dan inokulum standar pada daun primer lainnya. Sepuluh replikasi setiap perbandingan yang dianjurkan. bilas daun inokulasi dengan air segera setelah diinokulasi. Tempat kertas label pada inokulasi dengan inokulum daun standar dan pada setiap daun inoulasi dengan inocula dari berbagai jaringan. Hitung dan catat pelukaan 4-5 hari kemudian. Jika diinginkan, sampel yang dikumpulkan dapat dibandingkan satu sama lain pada dua daun utama berlawanan bukan dengan inokulum standar.

Penentuan konsentrasi virus yang aktif pada embrio selama pertumbuhan dan pematangan. Pilih kuncup bunga dari tanaman kacang sistemik terinfeksi dan tandai mereka dengan tanggal mekar. Panen benih pada tahap perkembangan yang berbeda, tandai jumlah hari setelah mekar. Catat morfologi dan berat basah. Giling dalam mortar sampel embrio 3-5 (mantel biji minus), Tambahkan 5-7 ml fosfat buffer. Bandingkan infectifvity dari inokulum embrio dengan standart inokulum. Buat inokulasi semua segera setelah panen sampel. Catat data sebagai berikut:

usia embrio (hari setelah mekar)	hijau berat sampel	avg lokal lesi / daun yang dihasilkan oleh inokulum dari		rasio A / B
		Embryo (A)	Embryo (B)

Penentuan konsentrasi virus yang aktif di jaringan yang terinfeksi penuaan dalam penyimpanan. Panen tanaman terinfeksi jaringan (biji mantel, embrio, daun, akar, dll) untuk penyelidikan. Terpisah menjadi bagian yang sama berat hijau (sekitar 2-4 g). Tempatkan setiap bagian ke dalam petridis yang bersih, kering, dilengkapi dengan kertas saring, untuk penyimpanan. Pada interval yang berbeda (jumlah hari pada suhu kamar atau suhu lain) ambil satu bagian keluar dan giling. Tambahkan  5-7ml fosfat buffer; suntik pada kacang Buncis. Bandingkan infectiviity porsi masing-masing dengan inokulum standar. mencatat data sebagai berikut:

Periode penyimpanan (hari di oC)	deskripsi sampel	avg lesi daun / lokal yang dihasilkan oleh inokulum dari		rasio A / B
		Embryo (A)	Embryo (B)

Waktu yang dibutuhkan: Jika tanaman kacang terinfeksi yang tersedia, untuk mempersiapkan bahan, inokulum, dan tanaman diinokulasi, sekitar 3 jam. Luka berkembang dalam 4-5 hari, waktu yang lebih lama mungkin diperlukan, tergantung pada lingkungan tersebut. Durasi percobaan lain akan bervariasi dengan prosedur yang diberikan, tetapi biasanya pengamatan dapat disimpulkan dalam 2-3 minggu setelah inokulasi.

Hasil: Suatu perbandingan jumlah luka yang dihasilkan oleh inocula dari daerah tanaman yang berbeda akan memberikan siswa suatu ide dari konsentrasi virus relatif dalam bagian tanaman yang berbeda diuji.

Perbandingan serupa dapat dibuat dari konsentrasi virus yang aktif di dalam embrio.

Catatan khususnya bahwa sebagai benih dewasa isi virus meningkat. Mantel biji dapat dibandingkan juga pada setiap tahap pertumbuhan embrio. akan dicatat bahwa sebagai isi virus embrio meningkatkan mantel biji konten virus menurun.

Perbandingan dari infectivities harus menunjukkan penurunan besar dalam infektivitas sampel embrio setelah 1 minggu penyimpanan, pengurangan yang signifikan pada sampel benih infektivitas setelah 2 minggu mantel, dan sedikit jika ada penurunan infektivitas sampel daun setelah 3 minggu penyimpanan.

Daftar Pustaka

CHEO, P.C. 1995. Effect of seed maturation on inhiibition of southern bean mosaic virus in bean. Phytopathology 45:17-21.